Mikrobiološke metode za proučevanje vode, tal, zraka

Mikroorganizmi so najmanjša, večinoma enocelična bitja, razširjena po naravi. Najdemo jih v vseh okoljih (zrak, tla, voda), pri ljudeh in živalih, v rastlinah.

Kakovostna raznolikost in število mikroorganizmov sta odvisna predvsem od prehranskih spojin. Pomembno pa je tudi vlažnost, temperaturni režim, zračenje, delovanje sončnih žarkov in drugi dejavniki.

Metode sanitarno-mikrobioloških raziskav naravni mediji lahko zaznajo prisotnost patogenih mikroorganizmov, določijo njihovo število in v skladu z dobljenimi rezultati razvijejo ukrepe za odpravo ali preprečevanje nalezljivih bolezni. Poleg tega je kvantitativno računovodstvo potrebno za modeliranje ekosistemov in razvijanje načel za upravljanje naravnih procesov. Razmislimo še, kaj se zgodi metode mikrobioloških raziskav.

Tla

Znanstveniki menijo, da je eden od možnih načinov prenosa nalezljivih bolezni. Z izolacijo bolnih ljudi ali živali patogeni mikroorganizmi prodrejo v tla. Nekateri izmed njih, še posebej spore, lahko dolgo ostanejo v tleh (včasih nekaj deset let). V tleh vstopite v patogene nevarnih okužb, kot so tetanus, antraks, botulizem itd. Metode sanitarno-mikrobiološkega preučevanja tal omogočajo določitev "mikrobne številke" (število mikroorganizmov v gramu zemlje), kot tudi koli-indeks (število E. coli).

Analiza tal: splošne informacije

Da metode mikrobiološke študije tal Najprej, neposredno mikroskopijo in sejanje na gosto hranilni medij. Prebivalci mikroorganizmov in njihovih skupin, ki živijo v tleh, se razlikujejo v svojem taksonomskem položaju in ekoloških funkcijah. V znanosti so združeni pod splošnim izrazom "biota tal". Grunt je habitat velikega števila mikroorganizmov. Gram zemlje vsebuje od 1 do 10 milijard svojih celic. V tem okolju poteka razgradnja organskih snovi s sodelovanjem različnih saprofitnih mikroorganizmov.

Mikroskopska metoda mikrobioloških raziskav: faze

Analiza okolja se začne z vzorčenjem. Če želite to narediti, uporabite predhodno očiščen in narezan alkoholni nož (lahko uporabite lopato). Po tem pripravimo vzorec. Naslednji korak je štetje celic na obarvane mrčes. Razmislimo vsako fazo posebej.

Vzorčenje

Pri analizi obdelovalnih tal se praviloma odvzamejo vzorci iz globine celotnega sloja. Najprej odstranite 2-3 cm od vrha prsti, saj lahko vsebuje tujo mikrofloro. Po tem se monoliti vzamejo s preučevanega mesta tal. Dolžina vsakega od njih mora ustrezati debelini sloja, iz katere morate vzeti vzorec.

Na mestu 100-200 kvadratnih metrov. m, vzamemo 7-10 vzorcev. Teža vsakega je približno 0,5 kg. Vzorce je treba temeljito pomešati v vrečki. Po tem vzemite povprečni vzorec, ki tehta približno 1 kg. Postaviti ga je treba v pergamentno (sterilno) vrečo, vgrajeno v vrečko iz tkiva. Pred neposredno analizo se vzorec shrani v hladilniku.

Priprava na raziskovanje

Mešana tla se vlije na suho steklo. Predhodno ga je treba drobiti z alkoholom in sežgati nad gorilnikom. Z lopatico se zemlja temeljito premeša in enakomerno razporedi. Brez neuspeha je potrebno odstraniti korenine, druge tuje elemente. Za to se uporabljajo pinceto. Pred delom pinceto in lopatico žarimo nad gorilnikom in ohladimo.

Od majhnih delov zemlje, porazdeljenih po steklu, se odvzamejo majhni deli. Tehtajo se v skodelici iz porcelana v tehničnem obsegu. Obvezna stopnja mikroskopske metoda mikrobioloških raziskav je posebna obdelava vzorca. Vnaprej je potrebno pripraviti 2 sterilne bučke. Njihova zmogljivost ne sme presegati 250 ml. 100 ml vode iz pipe se vlije v eno od steklenic. Iz nje vzamete 0,4-0,8 ml tekočine in navlažite vzorec tal v pastozno stanje. Mešamo ga 5 minut s prstom ali gumijastim pestrom.

Z vodo iz prve erlenmajerice se masa tal prenese v prazno bučko. Potem je ponovno podrgnjen. Po tem se masa prenese v bučko blizu plamena gorilnika. Posoda s talno suspenzijo streseta na ročici 5 minut. Po tem se pusti, da se usede približno 30 sekund. To je potrebno, da se veliki delci lahko usedejo. Po pol minute se masa uporabi za pripravo pripravka.

Štetje celic na fiksnih brisih

Neposredno mikroskopsko proučevanje prsti opravlja metoda mikrobioloških raziskav, razvil Vinogradsky. V določenem volumnu pripravljene suspenzije se šteje število celic mikroorganizmov. Študija fiksnih brisov vam omogoča dolgoročno shranjevanje zdravil in opravlja izračune v vsakem primernem času.

Priprava zdravila je naslednja. Določen volumen suspenzije (običajno 0,02-0,05 ml) nanesemo z mikropipeto na drsnik. K tej raztopini dodamo kapljico agar-agarja (polisaharida agaropectin zmesi in agaroze ekstrahiramo iz rjave in rdečih alg Črno morje) hitro mešali in razporejene na površini 4-6 sq. glej Raztrgamo posušeno na zraku in ga nastavimo 20-30 minut. alkohol (96%). Nato pripravek navlažimo z destilirano vodo, ki se doda v karbolni raztopini eritrozina 20-30 minut.

Po obarvanju ga opere in posuši v zraku. Celice se štejejo s potopljenim ciljem.

Sejanje na gostih medijih

Mikroskopski metode mikrobioloških raziskav lahko zazna veliko število mikroorganizmov. Toda, kljub temu to, metoda Seja se šteje za najpogostejšo prakso. Njegova bistvo je setev volumna pripravka (suspenzija v tleh) v petrijevki na gostem mediju.

To metoda mikrobioloških raziskav nam omogoča, da upoštevamo ne le količino, temveč tudi sestavo skupine in v nekaterih primerih sestavo vrste mikroskopske flore. Štetje števila kolonij je praviloma na dnu posode Petri v oddani svetlobi. Na štetju se pika položi z oznako ali črnilom.

Analiza vode

Mikroflora vodnega telesa praviloma odraža mikrobno sestavo zemlje okoli nje. V zvezi s tem, metode sanitarne in mikrobiološke študije vode in tal imajo posebno praktično vrednost pri proučevanju stanja določenega ekosistema. Sveži ribniki vsebujejo, kot pravilo, kokci, paličaste bakterije.

Anaerobi v vodi najdemo v majhnih količinah. Praviloma se reproducirajo na dnu rezervoarjev, v mulju, ki sodelujejo v procesih čiščenja. Mikroflora oceanov in morij predstavljajo predvsem solinske lovilne (halofilne) bakterije.

Praktično v vodi ni artesijskih izvirov mikroorganizmov. To je posledica sposobnosti filtriranja plasti tal.

Pogosto metode mikrobiološke raziskave vode upoštevamo določitev mikrobne številke in kolitisa ali kolijevega indeksa. Prvi indikator označuje število bakterij v 1 ml tekočine. Koli-indeks je število E. coli, prisotnih v literu vode, koliter-titer pa je najmanjša količina ali največja razredčitev tekočine, v kateri je še vedno mogoče zaznati.

Določitev mikrobne številke

Ta metoda sanitarnih mikrobioloških raziskav vode je naslednja. V 1 ml vode določimo število mezofilnih in fakultativnih anaerobov (vmesnih) aerobne lahko na mesno peptonski agar (primarna medija) pri 37 ° C. čez dan ustvariti kolonije, vidne s povečanjem 2-5 r. ali s prostim očesom.

Ključna faza metoda mikrobiološke raziskave vode seja. Iz vsakega vzorca se posežejo vsaj dve različni količini. Pri analizi črpalne vode se v vsako skodelico in 0,01-0,001 ml kontaminirane tekočine doda 1-0,1 ml čiste tekočine. Za sejanje 0,1 ml ali manj se tekočina razredči z destilirano (sterilno) vodo. Dosledno pripravite desetkratne razredčitve. V dve petrijevki dodamo 1 ml vsake od njih.

Raztopine so napolnjene s hranilnim agarjem. Predal se mora in ohladiti na 45 °. Po aktivnem mešanju medij ostane na vodoravni površini, da se strdi. Na 37 stopinj. Pridelki se gojijo ves dan. The metoda mikrobiološke raziskave vode omogoča upoštevanje rezultatov na tistih skodelicah, kjer je število kolonij v razponu od 30 do 300.

Zrak

Šteje se za tranzitni medij za mikroorganizme. Glavni metode mikrobioloških raziskav zraka sedimentacija (sedimentacija) in aspiracija.

Mikroflora zraka je pogojno razdeljena na spremenljivko in konstanto. Prvi vključujejo kvas, kokci, ki se tvorijo v pigmentu, šarene bacilije, palice in drugi mikroorganizmi, odporni na sušenje, izpostavljenost svetlobi. Predstavniki spremenljive mikroflore, ki prodirajo v zrak iz običajnega habitata za njih, ne preživijo dolgo preživetja.

V zraku velikih megastarskih mikroorganizmov je veliko več kot v zraku podeželskih območij. Zgoraj morja so gozdovi bakterij zelo majhni. Čiščenje zraka je olajšano z padavinami: sneg in dež. V zaprtih prostorih mikrobov veliko več kot v odprtih prostorih. Njihova količina se zviša v zimskem obdobju, če ni rednega prezračevanja.

Sedimentacija

To metoda mikrobioloških raziskav v mikrobiologiji velja za najpreprostejši. Temelji na poravnavanju kapljic in delcev na površini agarja v odprtem petrijevcu pod vplivom gravitacije. Metoda sedimentacije natančno ne določa števila bakterij v zraku. Dejstvo je, da je na odprti skodelici za ulov majhnih frakcij prašnih delcev in bakterijskih kapljic precej težko. Na površini se ohranijo predvsem veliki delci.

Ta metoda se ne uporablja pri analizi atmosferskega zraka. Za to okolje so značilna velika nihanja hitrosti pretoka zraka. Sedimentacija pa se lahko uporablja v odsotnosti bolj izpopolnjenih instrumentov ali vira električne energije.

Določitev mikrobne številke poteka po metodi Omelyansky. V skladu s tem, 5 minut na površini agarja s površino 100 kvadratnih metrov. cm poravna število bakterij, prisotnih v 10 litrih zraka.

Odredba 535 "O združevanju mikrobioloških metod raziskovanja"

Bakteriološka analiza zavzema pomembno mesto v kompleksu kliničnih in laboratorijskih dejavnosti, namenjenih diagnostiki, preprečevanju in zdravljenju različnih nalezljivih bolezni. Vendar pa niso omejeni na okoljske raziskave.

Posebno pomembna je bakteriološka analiza biološkega materiala v zdravstvenih ustanovah. Za raziskave, ki jih preživijo v zdravstvenih ustanovah, se postavljajo zahteve. Namen reda "O združevanju mikrobioloških metod raziskovanja" je izboljšati bakteriološko analizo, izboljšati kakovost in učinkovitost mikrobiološke diagnoze.

Mikroskopski pregled brisače za ženske

To je ključna metoda analize pri diagnozi spolno prenosljivih okužb in oportunističnih bolezni (ki jih povzročajo oportunistične bakterije).

Mikroskopska analiza vam omogoča, da ocenite kvalitativno in količinsko sestavo mikroflore, preverite pravilnost vzorčenja. Na primer, prisotnost vaginalnega epitelija v brisu, vzetem iz cervikalnega kanala, kaže na kršitev izbirnih pravil biološki test.

Povedati je treba, da mikrobiološko preiskavo v tem primeru na splošno spremljajo določeni problemi. Povezani so z dejstvom, da je v spodnjih delih genitalnega trakta običajno raznolika mikroflora, ki se spreminja v različnih starostnih obdobjih. Za izboljšanje učinkovitosti študije so bila razvita enotna pravila.

Diagnoza virusnih okužb

Izvajajo ga metode odkrivanja patogenov RNA in DNA. Temeljijo predvsem na določanju nukleotidnih zaporedij v patološkem materialu. Za to se uporabljajo molekularne sonde. So umetno proizvedene nukleinske kisline, ki dopolnjujejo virusne kisline, označene z radioaktivno oznako ali biotinom.

Posebna značilnost metode je večkratno kopiranje določenega fragmenta DNA, ki vključuje več sto (ali deset) nukleotidnih parov. Mehanizem replikacije (kopiranje) je, da se lahko zaključek začne le v določenih blokih. Za njihovo izdelavo se uporabljajo prajmeri (primerci). Sintetizirajo se oligonukleotidi.

PCR diagnostiko (polimerazna verižna reakcija) je enostavna za izvedbo. Ta metoda vam omogoča, da hitro pridobite rezultat z majhno količino patološkega materiala. S pomočjo diagnostike PCR se zaznajo akutne, kronične in latentne (skrite) okužbe.

Z občutljivostjo se ta metoda šteje za boljšo. Vendar pa trenutno preskusni sistemi niso dovolj zanesljivi, zato PCR diagnostike ne morejo popolnoma nadomestiti tradicionalnih metod.