Serološke reakcije: vrste, uporaba

Laboratorijska diagnoza skoraj vseh nalezljivih bolezni temelji na odkrivanje krvi v bolnikovih protiteles, ki so pridobljeni z antigenom patogen, serološkimi metodami. V zdravstveno prakso so vstopili od pozne devetnajstega do začetka dvajsetega stoletja.

Razvoj znanosti je pomagal določiti antigensko strukturo mikrobov in kemične formule njihovih toksinov. To je omogočilo ustvariti ne samo terapevtske, ampak tudi diagnostične serume. Dobljene so z uvajanjem oslabljenih patogenov v laboratorijske živali. Po nekaj dneh izpostavljenosti krvi kuncev ali miši se pripravki, ki se uporabljajo za identifikacijo mikrobov ali njihovih toksinov, pripravijo z uporabo seroloških reakcij.

Zunanji manifest takega odziva je odvisen od pogojev njegove formulacije in od stanja antigenov v pacientovi krvi. Če so delci mikrobov netopni, potem v serumu precipitate, lyse, vežejo ali imobilizirajo. Če so antigeni topni, pride do pojava nevtralizacije ali padavin.

Reakcija aglutinacije (PA)

Aglutinacija seroloških reakcij je zelo specifična. Je preprost pri izvedbi in je dovolj jasen, da hitro ugotovi prisotnost antigenov v serumu bolnika. Uporablja se za ugotavljanje reakcije Vidala (diagnoza tifusov in paratifov) in Veigla (tifus).

Temelji na specifični interakciji med človeškimi protitelesi (ali aglutinini) in mikrobnimi celicami (aglutinogeni). Po njihovem medsebojnem delovanju se oblikujejo delci, ki precipitirajo. To je pozitiven znak. Za pripravo reakcije, živih ali ubitih mikrobnih sredstev, gliv, protozoa, krvne celice in somatske celice.

Kemično je reakcija razdeljena na dve stopnji:

1. Specifična spojina protiteles (AT) z antigeni (AH).
2. Nespecifično - obarjanje konglomeratov AG-AT, t.j. nastajanje aglutinata.

Posredna reakcija aglutinacije (RPHA)

Ta reakcija je bolj občutljiva kot prejšnja. Uporablja se za diagnosticiranje bolezni, ki jih povzročajo bakterije, intracelularni paraziti, protozoji. To je tako specifično, da lahko zazna celo zelo nizko koncentracijo protiteles.

Za njeno izdelavo uporabljamo prečiščene eritrocite jagnjet in rdečih krvnih celic osebe, predhodno pripravljene s protitelesi ali antigeni (to je odvisno od tega, kaj želi laboratorijski tehnik). V nekaterih primerih se človeški eritrociti zdravijo z imunoglobulini. Šteje se, da so serološke reakcije eritrocitov prišle, če so bile deponirane na dnu cevi. Pozitivno reakcijo lahko rečemo, ko so celice razporejene v obliki obrnjenega dežnika, ki zasedajo celotno dno. Negativna reakcija se šteje, če so rdeče krvne celice poravnale v stolpcu ali v obliki gumba v sredini dna.

Reakcija padavin (RP)

Serološke reakcije te vrste služi za odkrivanje izredno majhnih delcev antigenov. To so lahko npr. Proteini (ali njihovi deli), beljakovinske spojine z lipidi ali ogljikovi hidrati, deli bakterij, njihovi toksini.

Serum za reakcijo dobimo z umetno okužbo živali, ponavadi kuncev. Ta metoda lahko prejme absolutno vsak precipitacijski serum. Nastavljanje reakcij seroloških padavin je podobno mehanizmu delovanja na reakciji aglutinacije. Protitelesa v serumu se kombinirajo s antigeni v koloidna raztopina, ki tvorijo velike proteinske molekule, ki so odložene na dno cevi ali na substrat (gel). Ta metoda velja za zelo specifično in lahko zazna celo zanemarljive količine snovi.

Uporablja se za diagnosticiranje kuge, tularemije, antraksa, meningitisa in drugih bolezni. Poleg tega je vključen v forenzični zdravniški pregled.

Gel padavinske reakcije

Serološke reakcije lahko izvajamo ne samo v tekočem mediju, ampak tudi v agar gelu. To imenujemo razpršena padavina. S pomočjo je preučevana sestava kompleksnih antigenskih zmesi. Ta metoda temelji na kemotaksiji antigenov na protitelesa in obratno. V gelu se premikajo drug proti drugemu pri različnih hitrostih in se sestajajo v obliki padavinskih linij. Vsaka vrstica je en niz AG-AT.

Reakcija nevtralizacije eksotoksina z antitoksinom (PH)

Antitoksični serumi lahko nevtralizirajo učinek eksotoksina, ki proizvaja mikroorganizme. To je osnova za te serološke reakcije. Mikrobiologija uporablja to metodo za titriranje serumov, toksinov in toksoidov ter določanje njihove terapevtske aktivnosti. Nevtralizacijo toksina določajo konvencionalne enote - AE.

Poleg tega je zaradi te reakcije možno določiti vrsto ali vrsto pripadnosti eksotoksina. To se uporablja pri diagnozi tetanusa, davice, botulizma. Študijo lahko izvedemo tako "na steklu" kot tudi v gelu.

Reakcijska reakcija (RL)

Imunski serum, ki vstopi v bolnikovo telo, ima poleg svoje glavne funkcije pasivno imuniteto, tudi lizirajoče lastnosti. Je sposoben raztopiti mikrobna sredstva, celične tujke in viruse, ki vstopajo v bolnikovo telo. Odvisno od specifičnosti seruma, ki vsebuje protitelesa, bakteriolizini, citolizini, spirohetolizini, hemolizini in drugi izolirajo.

Ta specifična protitelesa imenujemo "komplement". Vsebuje v skoraj vseh telesnih tekočinah, ima kompleksno strukturo proteinov in je izjemno občutljiva na vročino, tresenje, kislino in neposredno sončno svetlobo. Toda v suhem stanju je sposobna obdržati lastnosti lizanja do šest mesecev.

Obstajajo vrste seroloških reakcij te vrste:

- bakterioliza;

- hemoliza.

Bakterioliza se izvaja s pomočjo bolnikovega krvnega seruma in specifičnega imunskega seruma z živimi mikrobi. Če je v krvi dovolj krvnega dodatka, bo raziskovalec videl bakterijsko lizo, reakcija pa bo pozitivna.

Druga serološka reakcija krvi je, da se bolnikova suspenzija eritrocitov zdravi s serumom, ki vsebuje hemolizine, ki se aktivirajo samo v prisotnosti določenega komplimenta. Če je eden, laboratorijski pomočnik opazuje raztapljanje rdečih krvnih celic. Ta reakcija se pogosto uporablja v sodobni medicini za določitev titer komplementa (tj njena najmanjša količina izzove lizo eritrocitov) v krvnem serumu in za proizvodnjo komplementnega vezivnem testu. Tako se izvaja serološki odziv na sifilis - Wassermanova reakcija.

Reakcija fiksacije komplementa (RCC)

Ta reakcija se uporablja za odkrivanje protitelesca v krvnem serumu pacientov z infekcijskim sredstvom in tudi ugotavljanje patogena iz njene antigenske strukture.

Do te točke smo opisali preproste serološke reakcije. RSK velja za kompleksno reakcijo, ker ne deluje z dvema, temveč s tremi elementi: protitelesom, antigenom in komplementom. Njegovo bistvo leži v dejstvu, da interakcija protitelesa in antigena poteka le v prisotnosti beljakovin komplementa, ki se adsorbirajo na površini nastalega AG-AT kompleksa.

Sami antigeni po dodajanju komplementa doživijo pomembne spremembe, ki kažejo na kakovost reakcije. Lahko je liza, hemoliza, imobilizacija, baktericidno ali bakteriostatično delovanje.

Reakcija se zgodi v dveh fazah:

1. Oblikovanje antigen-protitelesnega kompleksa, ki je raziskovalcu vizualno neviden.
2. Sprememba antigena pod delovanjem dopolnila. To fazo lahko pogosto sledimo s prostim očesom. Če vizualni odziv ni viden, uporabite dodatni sistem indikatorjev, ki vam omogoča odkrivanje sprememb.

Sistem kazalnika

Ta reakcija temelji na vezavi komplementa. Eno uro po formulaciji DSC dodamo v epruveto očiščene eritrocite ovac in hemolitični serum, ki ne vsebuje dodatka. Če nekonjugirani komplement ostane v epruveti, se bo pridružil kompleksu AG-AT, ki je bil oblikovan med ovčjima celicama krvi in ​​hemolizinom in povzročil njihovo raztapljanje. To pomeni, da je RCC negativen. Če so rdeče krvne celice ostale nedotaknjene, potem je reakcija pozitivna.

Reakcija hemaglutinacije (RGA)

Obstajajo dve bistveno drugačni reakciji na hemaglutinacijo. Ena izmed njih je serološka, ​​se uporablja za določanje krvnih skupin. V tem primeru eritrociti sodelujejo s protitelesi.

In druga reakcija se ne nanaša na serološko, saj rdeče krvne celice reagirajo s hemaglutinini, ki jih povzročajo virusi. Ker vsak agent deluje le na specifičnih eritrocitih (piščanca, jagnjetina, opica), se lahko ta reakcija obravnava ozko specifična.

Razumeti, pozitivna reakcija ali negativno, je možno s položajem krvnih celic na dnu epruvete. Če njihova slika spominja na obrnjen dežnik, potem je želeni vir prisoten v pacientovi krvi. In če so bile vse rdeče krvne celice oblikovane kot kovanci, potem ni nobenih neznanih patogenov.

Reakcija inhibicije hemaglutinacije (RTGA)

To je zelo specifična reakcija, ki vam omogoča, da določite vrsto, vrsto virusa ali prisotnost specifičnih protiteles v bolnikovem serumu.

Njegovo bistvo je v tem, da protitelesa, dodana epruveti s preskusnim materialom, preprečujejo precipitacijo antigenov na rdečih krvnih celicah, s čimer prenehajo hemaglutinacijo. To je kvalitativna indikacija prisotnosti specifičnih antigenov v krvi do določenega želenega virusa.

Reakcija imunofluorescence (RIF)

Reakcija temelji na sposobnosti odkrivanja kompleksov AG-AT fluorescenčna mikroskopija po njihovi obdelavi s fluorokromnimi barvili. Ta metoda je enostavna za uporabo, ne zahteva dodelitve čiste kulture in traja malo časa. Nepogrešljiv je za hitro diagnozo nalezljivih bolezni.

V praksi so te serološke reakcije razdeljene na dve vrsti: neposredno in posredno.

Neposredni RIF se proizvaja z antigenom, ki se predhodno zdravi s fluorescentnim serumom. In Posredno je, da je zdravilo najprej obdelamo s konvencionalno diagnosticum vsebuje protitelesa proti želeni antigen, in nato ponovno uporabljene fluorescentno sirotke, ki je specifičen za proteinov kompleksa K-AT in mikrobnih celic postanejo vidna z mikroskopom.