Bakteriološka metoda raziskovanja: faze, cilji, značilnosti

Študija bakterij je zelo pomembna za človeka. Do sedaj je bilo ugotovljeno veliko število prokariontov, ki se med seboj razlikujejo glede na patogenost, porazdelitev, obliko, velikost, število flagella in drugih parametrov. Podrobno preučevanje tega sevanja se uporablja bakteriološka metoda.

Katere so metode za analizo bakterijskih celic?

Za ugotavljanje, ali so bakterije patogene, se kultura testira na različne načine. Med njimi:

1. Bakterioskopska metoda.

2. Bakteriološka metoda.

3. Biološka metoda.

Bakterioskopsko in bakteriološko raziskovalne metode temeljijo neposredno na delu s prokariontskimi celicami, kadar je potrebna biološka analiza za preučevanje učinka takšnih celic na živi organizem eksperimentalnih živali. Glede na stopnjo manifestacija teh ali drugih znakov znanstvenik bolezni lahko sklepamo na prisotnost ali odsotnost patogenih bakterij v vzorcu, kot tudi njihovo naravno širijo v telesu živali, za svojo kulturo in uporabljajo drugje.

Bakteriološka metoda raziskovanja se razlikuje od bakterioskopske metode. V prvem je za analizo uporabljena posebej pripravljena kultura živih prokariontov, ko druga deluje na mrtvih ali živih celicah na drsniku.

Faze bakteriološke metode preiskave. Mikrobiologija

Načelo preučevanje lastnosti bakterijske kulture je lahko koristno za mikrobiologi, znanstvenikov, ki so določeni za raziskovanje prokariontske celice, kot tudi za laboratorij, katerega naloga je določiti patogeni ali ne-patogene bakterije in nato bolnikovo diagnozo.

Metoda proučevanja bakterij je razdeljena na tri faze:

1. Izolacija bakterij iz prvotnega vzorca.

2. Sejanje bakterij in gojenje čiste kulture, preučevanje njegovih lastnosti.

3. Podrobna študija bakterijskih celic.

Prva faza

Vzorec ali mazilo vzamemo iz proste površine medija ali pacienta. Tako dobimo "koktajl" iz različnih vrst bakterij, ki jih je treba posejati v hranilni medij. Včasih je mogoče nemudoma prepoznati potrebne bakterije in vedeti, kakšne so njihove žarišča v telesu.

Po dveh ali treh dneh se izbrane kolonije izberejo in plasti na trdnih medijih petrijevke s pomočjo sterilne zanke. Mnogi laboratoriji delajo s preskusnimi cevmi, kjer je lahko prisoten trdni ali tekoči hranilni medij. Tudi bakteriološka metoda raziskovanja v mikrobiologiji.

Druga stopnja

Po pridobitvi posameznih kolonij bakterij se izvede neposredna makro in mikroanaliza. Izmerimo vse parametre kolonij, določimo njihovo barvo in obliko. To se pogosto opravi tako, da štejemo kolonije na petrijevko, nato pa v izhodiščni material. To je pomembno pri analizi patogenih bakterij, od katerih je odvisna stopnja bolezni.

Bakteriološka metoda preiskave, katere druga stopnja je preučevanje posameznih kolonij mikroorganizmov, je lahko povezana z biološko metodo bakterijske analize. Drugi cilj dela na tej stopnji je povečanje količine izvornega gradiva. To je mogoče storiti na hranilnem mediju in je mogoče preskusiti in vivo v živih eksperimentalnih organizmih. Patogene bakterije se bodo množile in posledično bo krv vsebuje milijone prokariontskih celic. Iz odvzete krvi je enostavno pripraviti potrebno delovno snov bakterij.

Tretja stopnja

Najpomembnejši del študije je določitev morfoloških, biokemičnih, toksigenih in antigenih lastnosti bakterijske kulture. Delo poteka s predhodno "očiščenimi" pridelki na hranilnem mediju, pa tudi s preparati (pogosto obarvani) pod mikroskopom.

Za prepoznavanje pripadnosti patogenih ali pogojno patogenih bakterij določeni sistematični skupini in določanje njihove odpornosti proti drogam omogoča bakteriološka metoda preiskave. Faza 3 - antibiotiki, tj. Analiza obnašanja bakterijskih celic v pogojih zdravil v okolju.

Študija odpornosti kulture na antibiotike je zelo praktično pomembna, kadar je za določenega pacienta treba predpisati potrebne in najpomembnejše učinkovite droge. Tu in bakteriološka metoda raziskovanja lahko pomagata.

Kaj je hranilni medij?

Za razvoj in razmnoževanje bakterij moramo biti vnaprej pripravljeni hranilni mediji. S konsistenco so lahko tekoči ali trdni in po izvoru - rastlinski ali živalski.

Osnovne zahteve za hranilne snovi:

1. Sterilnost.

2. Največja preglednost.

3. Optimalna kislost, osmotski tlak, aktivnost vode in drugih bioloških količin.

Priprava izoliranih kolonij

1. Drigalskyjeva metoda. Sestoji iz tega, da se bakterijska zanka uporablja z raztrgano raztopino vrste mikroorganizmov. Ta zanka se izvaja na prvi Petrijevi posodi s hranilnim medijem. Nadalje, brez spreminjanja zanke, se metoda preostalega materiala izvede na drugi in tretji plošči Petrija. Torej na zadnjih vzorcih kolonije bakterije ne bodo preveč tesno zasejane, s čimer se poenostavi možnost iskanja bakterij, potrebnih za delo.

2. Metoda Koch. Uporablja cevi s staljenim hranilnim sredstvom. Na zanko ali pipeto položimo bakterije, po katerih se vsebina cevi izlije na posebno ploščo. Agar (ali želatina) se čez nekaj časa zamrzne in v njegovi debelini je enostavno najti potrebne kolonije celic. Pomembno je, preden začnemo razredčiti mešanico bakterij v epruvetah, tako da koncentracija mikroorganizmov ni zelo velika.

Bakteriološka metoda preiskave, katere faze temeljijo na izolaciji želene bakterijske kulture, ne naredi brez teh dveh metod za iskanje izoliranih kolonij.

Antibiotikogram

Vizualno reakcijo bakterij na zdravila lahko vidimo na dva praktična načina:

1. Metoda papirnih diskov.

2. Razredčitev bakterij in antibiotikov v tekočem mediju.

Metoda papirnega diska zahteva kulturo mikroorganizmov, ki so bili pridelani na trdnem hranilnem mediju. Na tem mediju se položi več okroglih papirjev, impregniranih z antibiotiki. Če zdravilo uspešno odpravi nevtralizacijo bakterijske celice, Po takem zdravljenju bo mesto brez kolonij. Če je reakcija na antibiotik negativna, bakterije preživijo.

V primeru uporabe tekočega hranilnega sredstva se najprej pripravijo več cevi s kulturo bakterij različnih stopenj razredčenja. Antibiotiki se doda v te cevi in ​​skozi dan opazujejo proces medsebojnega delovanja snovi in ​​mikroorganizmov. Na koncu je pridobljen kvalitativni antibiotik, iz katerega lahko ocenimo ucinkovitost zdravila za dano kulturo.

Glavne naloge analize

Tukaj so navedeni cilji in faze bakteriološke metode preiskave.

1. Pridobite izvorno gradivo, ki bo uporabljeno za izolacijo bakterijskih kolonij. Lahko je raztrgan od površine katerega koli predmeta, sluznice ali votline človeškega telesa, krvnega testa.

2. gojenje kulture na trdnem hranilnem mediju. Po 24-48 urah na petrijevki najdete kolonije bakterij različnih vrst. Izberemo zahtevana morfološka in / ali biokemična merila in z njim opravljamo nadaljnje delo.

3. Reprodukcija dobljene kulture. Bakteriološka metoda raziskovanja lahko temelji na mehanski ali biološki metodi povečanja števila bakterijskih kultur. V prvem primeru se delo opravi s trdnimi ali tekočimi hranilnimi sredstvi, na katerih se bakterija pomnoži v termostatu in tvori nove kolonije. Biološka metoda zahteva naravne pogoje za povečanje števila bakterij, zato je testna žival okužena z mikroorganizmi. Nekaj ​​dni kasneje je veliko prokariontov mogoče najti v krvnem vzorcu ali masti.

4. Delo s prečiščeno kulturo. Za določitev taksonomsko položaj bakterij, kot tudi njihovo pripadnost patogenov, je treba opraviti temeljito analizo celic na osnovi morfoloških in biokemičnih lastnosti. Pri preiskovanju patogenih skupin mikroorganizmov je pomembno vedeti, kako učinkovito je delovanje antibiotikov.

To je bila splošna značilnost bakteriološke metode preiskave.

Značilnosti analize

Glavno pravilo izvajanja bakterioloških raziskav je največja sterilnost. Če delo poteka s preskusnimi cevkami, je treba kulture in presaditve bakterij izvajati le v ogrevanem okolju.

V vseh fazah bakteriološke metode preiskave je treba uporabiti posebno zanko ali pipeto Pasteur. Oba instrumenta je treba predhodno obdelati v plamenu žareče svetilke. Kar se tiče pipete Pasteur, je treba pred toplotno sterilizacijo konico pipete prekiniti s pinceto.

Tehnika setve bakterij ima tudi lastne značilnosti. Prvič, pri setvi na trdnem mediju izvedite bakterijsko zanko na površini agarja. Zanka mora seveda na površini že imeti vzorec mikroorganizmov. Uporablja se tudi za sejanje znotraj gojitvenega medija, pri čemer mora zanko ali pipeta doseči dno Petrijevega jedi.

Pri delu s tekočimi mediji se uporabljajo cevi. Pomembno je zagotoviti, da se tekočina ne dotika robov laboratorijsko steklovino ali plute in uporabljenih orodij (kapalko, tečaj), se ne dotikajte tujih predmetov in površin.

Pomen biološke metode raziskovanja

Analiza vzorca bakterij ima praktično uporabo. Najprej se lahko v medicini uporabi bakteriološka metoda raziskovanja. Na primer, potrebno je preučiti pacientovo mikrofloro, da bi ugotovili pravilno diagnozo in prav tako pripravili pravilno zdravljenje. Tu pomaga antibiotikogram, ki bo pokazal aktivnost drog proti povzročitelju bolezni.

Analiza bakterij se uporablja v laboratoriju za ugotavljanje nevarnih bolezni kot so tuberkuloza, ponavljajoči tifus ali gonoreja. Uporablja se tudi za proučevanje bakterijske sestave tonzilov, votlin organov.

Bakteriološka metoda raziskovanja se lahko uporabi za določitev kontaminacije okolja. Glede na kvantitativno in kvalitativno sestavo brisov s površine predmeta stopnjo populacije tega medija določajo mikroorganizmi.