Tinktorialne lastnosti so kaj?

Pred študijem mikroorganizmov pod mikroskopom se vzorec, ki se preučuje, podvrže posebni pripravi. V naravni obliki so skoraj vse bakterije prozorne, zato so obarvane z barvili. Obarvanje nam omogoča, da določimo morfološke lastnosti mikrobov v preiskavi in ​​njihovo pripadnost eni ali drugi vrsti. Sposobnost mikroorganizmov za zaznavanje barv se imenuje tinktorialne lastnosti. Z njihovo pomočjo biologi določajo vrsto mikrobe, njegove parametre, značilnosti struktur in tudi identificirajo patogene nalezljivih bolezni. Iz tega članka boste podrobneje spoznali, da gre za tinktorične lastnosti in kako se uporabljajo v znanosti.

Naloge, ki jih rešuje barvna metoda

Najprej bomo ugotovili, kakšen je pomen tinktorskih lastnosti mikroorganizmov. Barvanje vzorca je ena ključnih tehnik mikrobiologije, ki omogoča študij zunanje in notranje strukture organizmov. Bakterije so prosojni mikroorganizmi, ki refrakcijo svetlobnih žarkov. Zato jih v navadni mikroskopiji ne moremo upoštevati. Različni deli bakterij drugače delujejo z barvilom. Tinktorialne lastnosti so odlična priložnost za raziskovalce. Ker so drugačni v različnih mikroorganizmih, nam omogočajo, da ugotovimo njihove najpomembnejše lastnosti: oblika, velikost, struktura, lokacija in tako naprej.

Priprava vzorca in njegovo barvanje

Ne glede na to, katero tehniko barvanja uporablja raziskovalec, ta postopek sestavlja več obveznih korakov:

1. Priprava vzorca. V kapljici vode, ki je nameščena na drsniku, se preučuje gradivo s pomočjo bakteriološke zanke.
2. Sušenje brisov. Izvaja se pri sobni temperaturi ali v toku toplega zraka (vendar ne preveč blizu vira toplote).
3. Pritrditev. Predpostavlja pritrjevanje mikroorganizmov na steklo, da se poveča njihova dovzetnost za barvanje.
4. Barvanje. Barvilo se nanese na preskusni vzorec in pusti, da stoji nekaj časa. Nato odstranimo ostanke barvila in vzorec speremo z vodo.
5. Sušenje. Končna faza, ki vam omogoča, da se znebite ostankov vode po izpiranju. Po sušenju je vzorec pripravljen za pregled pod mikroskopom.

Skupna barvila

Obarvanje vzorcev poteka s pomočjo anilinskih barvil z različnim indeksom kislosti (pH). Razdeljeni so na: osnovno (napetost na drugo črko o), kisla in nevtralna.

V osnovnih barvah delujoči agent je kation. S pomočjo različnih reagentov je mogoče dobiti različne barve obarvanja mikrobov:

1. Red - pirina, safranina, nevtralnega in magenta.
2. Violet - tionin, metil, gentij in kristalno vijolična.
3. Modra je metilen modra in Victoria.
4. Zeleni - malahit in metilenska zelenica.
5. Črna je indulin.
6. Rjava je vesuvin in krizo.

V kislih barvilih anion je pritrjen na barvne lastnosti. Med njimi so najpogostejši:

1. Rdečega - kiselega fuksina in eozina.
2. Črna je nigrosin.
3. Rumena je pikronska kislina.

Nevtralne barve lahko obarvajo tako anjone kot katione. Kot izreden primer teh se lahko imenuje rodamin V.

Obstoječe metode obarvanja, ki temeljijo na tinktorialnih lastnostih mikroorganizmov, lahko razdelimo na tri glavne vrste: vitalno, posturalno in barvno obarvanje. Vsako od teh metod bomo podrobneje obravnavali.

Bistvena pot

Ta metoda se imenuje tudi intravitalna, zato se obarvanje opravi za mikroskopiranje živih organizmov. Uvajanje barvnega zdravila omogoča proučevanje značilnosti znotrajceličnih struktur in tkiv. Obstajajo tudi načini vitalnega obarvanja, ki nakazujejo, da vzorec vzame takoj po obarvanju.

Za intravitalno obarvanje se uporabljajo posebne barve, za katere je značilna nizka toksičnost in visoka moč penetracije. Poleg vitalnih priprav so za reševanje tega problema uporabljeni tudi fluorokrozi ali fluorescenčna barvila.

Posturalna pot

Za razliko od prejšnje različice, tukaj se obarvanje opravi po usmrtitvi mikroorganizmov. Metode naknadnega barvanja so razdeljene na preproste in zapletene. Enostavno lahko določi morfološke lastnosti preučevanih organizmov: oblika, velikost, lokacija, lokacija. Kompleksne metode so ozko usmerjene in omogočajo pridobivanje informacij o strukturi mikroorganizma. Najpogosteje kompleksne metode barvanja nosijo imena njihovih ustvarjalcev. Od teh so najbolj priljubljene naslednje metode.

Gramova metoda. Metoda, razvita v poznem 19. stoletju, temelji na diferenciaciji mikrobov od prepustnosti celičnih sten. S pomočjo anilinskih barvil (encijskega vijoličnega ali metilnega) in naknadnega pranja raziskovalec prejme dve vrsti klicev: gram-pozitivna (značilna modra barva) in gram-negativna (zavarovana). Da bi dobili popolnejšo sliko, se uporablja tudi rdeče barve, po obdelavi pa celo barvni odtenki pridobijo barvo - od roza do rdeče barve.

Gramova metoda omogoča razvrsti mikrobe in izvedejo njihovo ločitev glede na tinktorske lastnosti. To je ena od najpreprostejših in najpogostejših metod priprave vzorca za mikroskopijo. Uporabljena vrednost te tehnike je diagnosticiranje različnih nalezljivih bolezni.

Metoda Tsile-Nielsen. Ta metoda je bila razvita tudi konec XIX. Stoletja. Temelji na določitvi kisline odpornosti bakterij z madežem. S to metodo, zaradi tinktikalnih lastnosti mikroorganizmov, je mogoče identificirati patogene tuberkuloze, gob in mikobakterioze.

Metoda Romanovsky-Giemsa. Ta metoda je bila razvita že v začetku dvajsetega stoletja. Njegova bistvo je v tem, da po obarvanju vzorca s posebnim barvilom acidofilne bakterije pridobijo različne odtenke rdečih in bazofilnih bakterij - od vijolične do modre barve.

Acidofili pokličejo mleko in ocetna kislina bakterij, za katerega je potrebna nizka kislost medija. Basofili so mikrobi, ki jih je mogoče barvati z osnovnimi barvili. Tako metoda temelji na ločevanju mikrobov od vrednosti kislosti medija. Uporablja se v študiji morfologije protozoa in spiroheta.

Metoda Burry-Hins. Omogoča določanje prisotnosti bakterij v kapsulah.

Morozovova metoda. Ta metoda obarvanosti omogoča, da je vidna zasteklitev bakterij. Za to je potrebno izvesti takšne manipulacije:

1. Vzorec vzamemo s kislino, da se plašč lahko sprosti.
2. Popustite ohlajeno krpo s taninom.
3. Barvite vzorec s srebrovim nitratom.

Kot rezultat, postane vidna bakterija z vsemi svojimi flagella. Njena barva se lahko giblje od rumene do rjave barve.

Obarvanje s sporami

Tinktorialne lastnosti mikroorganizmov omogočajo, s pomočjo barve, omogočiti opaziti njihove spore. Za to se najpogosteje uporablja tehnika Tsilya-Nilson. Njeno bistvo je obdelava testnega vzorca s fuchsin Tsil in njegova nadaljnja razbarvanje s pomočjo 1% žveplove kisline. Posledično so spore obarvani rožnato in dobro izstopajo proti ozadju modrih bakterij.

Da bi dobili vidno sliko o sporu, Orzeszkoova tehnika prav tako omogoča. Po tej metodi se lupine spore najprej vlečejo pri visoki temperaturi s kislino, nato pa se uporabi barvilo Ziehl-Nilson.

Strukturne značilnosti mikrobov

Celica mikroorganizma običajno sestoji iz njihovih sten (membrane), citoplazemske membrane, citoplazme, ki vsebuje nukleotide in vključkov v svoji sestavi. Nekatere vrste mikrobov imajo tudi flagella, pili ali cilia in lahko tvorijo kapsule ali spore.

Lupina mikroorganizma določa njegovo obliko in jo varuje pred škodljivimi okoljskimi pogoji in osmotskim notranjim tlakom. Stene mikrobov imajo precej kompleksno kemično sestavo in strukturo. V Gram-pozitivnih in Gram-negativnih celicah se razlikujejo. Prvi imajo debelo celično steno, ki vsebuje teihoične kisline in nekaj lipidov. Stena druge sestavljajo njihove polipeptidne in polisaharidne plasti.

Zunaj je celična stena prekrita s sluznico. V nekaterih mikrobi lahko poveča (nabrekne) tvorbo kapsule, ki jo sestavljajo predvsem polisaharidi in včasih polipeptidi. Ne reagira na madež. Zato se taki mikrobi proučujejo z uporabo metode Burri-Hins. Pri nekaterih patogenih živalih (na primer pnevmokokuku) se kapsula oblikuje le v organizmih živali ali ljudi.

V študiji mikroskopov pod mikroskopom Pozornost je namenjena tudi obarvanju citoplazme in njegovih struktur. Citoplazmo lahko obarvamo homogeno (homogeno) ali heterogeno (prisotnosti organskih ali anorganskih snovi so prisotne). Za preučevanje vključkov uporabite posebne načine barvanja (na primer glede na Neisser). Poleg tega se v citoplazmi določi prisotnost jedra ali nukleotida.

Ko smo izvedeli, da gre za tinktorske lastnosti in kako pomagajo pri mikroskopiji, bomo upoštevali značilnosti nekaterih pogostih mikroorganizmov.

Streptokoki

Z vidika tinktorialnih lastnosti so streptokoki Gram-pozitivni mikroorganizmi, zato jih določajo Gramova metoda. Najsvetlejša barva teh bakterij se pojavi, ko je izpostavljena modri Laffer. Struktura njihovih celic je podobna verigi.

Salmonela

So fakultativni anaerobi, od katerih je večina mobilnih zaradi prisotnosti flagella. Na gosto hranljivo gojišče se salmonele zbirajo v okrogle belo-sive kolonije. Spor ne tvori, ima peritrichs in mikrokapsule. Tako kot streptokoki je salmonela obarvana z metodo Gram. Razlika je v tem, da so tinktorične lastnosti salmonele gram-negativne.

Meningococcus

Imajo zaokroženo polimorfno obliko. Na hranilnem mediju se nahajajo v parih. Tinktorialne lastnosti meningokokov so takšne, da so gram-negativne, vendar se ne odzovejo jasno na barvanje grama. Neenakomerna obarvanost je posledica dejstva, da je starejša celica, šibkejša pa je njegova tinktorska lastnost. Flagellum nima meningokokov, vendar ne tvori spora.

Cholera Vibrio

Ta mikroba ima en polar flagellum, ki je opremljen s plaščem in valovito membrano. Cholera vibrio ima izrazito mobilnost. Odlikuje ga polimorfizem. Tinktorialne lastnosti vibrio kolere povzročajo njegovo barvanje z anilinskimi barvili. Praviloma je voda fuchsin Pfeifer ali carbolic fuchsin Shlya.

E. coli

To je izbirni anaerob, ki ne tvori spore. Celice so v obliki palic z zaobljenimi konci. Tiktorične lastnosti Escherichia coli nosijo gram-negativne bakterije. Smeri bakterij s periferno lociranim flagelom se lahko premikajo.

Neutrofili

To ime je dobilo mikrobe zaradi svojih tinktarijskih lastnosti. Neutrofili se lahko intenzivno obarvajo po Romanovskovi metodi, tako osnovnih barvil kot kislega eozina. Odrasle bakterije imajo segmentirano jedro, kar pomeni, da pripadajo polimorfonuklearnim celicam. Imajo lepilo, mobilnost, pa tudi sposobnost za kemotaksijo in zajemanje delcev. Skupaj z bazofili in eozinofili pripadajo granulocitom.

Basofili

Po analogiji s prejšnjimi mikrobi so te bakterije dobili zaradi svoje tinktorialne lastnosti. Basofili so intenzivno obarvani z glavnim barvilom in niso popolnoma obarvani s kislim eozinom. Imajo velike granulocite in vsebujejo veliko: histamin, serotonin, prostaglandini, levkotrieni in drugi mediatorji vnetnih in alergijskih procesov.

Eozinofili

Za razliko od dveh prejšnjih granulocitov, so ti mikrobi intenzivno obarvani samo s kislim barvilom in niso obarvani z glavnimi pripravki. Eozinofili imajo sposobnost ekstravazacije, kemotaksije in amoeboidnega gibanja. Lahko absorbirajo in vežejo številne mediatorje vnetnih in alergijskih reakcij.