Pravila za določanje krvne skupine glede na sistem ABO

Postopek določanja krvnih skupin po ABO sistemu je določitev antigenov A in B v eritrocitih s standardnimi protitelesi in uporaba aglutininov v plazmi ali serumu krvi, ki se analizira s standardnimi eritrocitnimi celicami. Tehnika je bila razvita na začetku 20. stoletja in se še vedno aktivno uporablja v medicini. Določanje antigenov A in B je posledica anti-A in anti-B zeolitona.

Osnovni pojmi

Donatorji vedno določajo ne le antigene v eritrocitih, ampak tudi aglutinini v serumu (plazmi) z uporabo standardnih eritrocitov. Venska kri se uporablja kot biomaterial. Pred preskusom morate pred preskusom opustiti maščobno hrano in ne kaditi pol ure pred preskusom. Krvne skupine se določijo dvakrat: najprej v oddelku za obdelavo, kjer se material nabira, nato pa potrdi študija v laboratoriju.

Opredelitev krvnih skupin po sistemu ABO je glavni preizkus, ki se uporablja pri transfuziologiji. Prav tako je podoben sistem krvnih skupin prisoten pri nekaterih živalih, na primer pri šimpanzah, gorilih in bonobosu.

Zgodovina odkritja

V znanosti je splošno sprejeto mnenje, da je metodo določanja krvnih skupin s sistemom ABO prvič identificiral avstrijski znanstvenik Karl Landsteiner leta 1900. Nato je v svojem delu opisal tri vrste antigenov. Za to je v tridesetih letih dobil Nobelovo nagrado za medicino in fiziologijo. Ker med znanstveniki ni bilo tesnih odnosov, so kasneje ugotovili, da je češki serolog Jan Janski, neodvisno od raziskav K. Landsteinerja, prvič opisal štiri človeške krvne skupine, vendar njegovim študijam ni bilo znano široko občinstvo. Zdaj je klasifikacija razvila J. Jansky, ki se uporablja v Rusiji in republikah nekdanje ZSSR. V ZDA je WL Moss ustvaril podobno delo leta 1910.

Metoda določanja krvnih skupin po sistemu ABO z uporabo tsoliklonov

Krvno skupino je treba določiti v prostoru z dobro osvetlitvijo, pri temperaturi med 15 in 25 stopinj Celzija, ker lahko odstopanja od te norme vplivajo na rezultate študije. Začetki in priimek pacienta so napisani na plošči ali plošči. Od leve proti desni ali okrog kroga se uporablja standardna oznaka za skupine (O (I), A (II), B (III)). Pod njimi se po kapljicah dodajo primerni serumi z ločenimi pipeti za vsako vrsto. Nato jim dodamo bolnikovo kri. Gradivo za raziskave se vzame iz ušesnega ali prstnega prsta. To zahteva tehniko določanja krvne skupine glede na sistem ABO.

Prav tako je prav, da se po nastanku krvnih strdkov v epruveti uporabi rdeče krvne celice. Potrebno je, da je količina seruma večja od količine dodane krvi desetkrat. Po tem se kapljice zmešajo s steklenimi palicami (posebej za vsako). V petih minutah rahlo zaniha ploščo in opazuje nastanek reakcije hemaglutinacije. Ugotovljeno je v tem, da se pojavijo majhne rdeče kepe, ki se združujejo v večje. Serum v tem času skoraj popolnoma izgubi barvo.

Da bi preprečili lažno hemaglutinacijo enostavnega lepljenja rdečih krvnih celic, po treh minutah dodamo eno kapljico soli in preverimo, ali ostaja aglutinacija. Če je tako, potem je res. Vse, definicija krvnih skupin glede na sistem ABO na tem je končana.

Razlaga rezultatov

Posledično lahko pride do štirih reakcij:

• ni aglutinacije s katerim koli sera - prva skupina O (I);
• reakcija je bila izražena s sera I (ab) in III (a) - drugo skupino A (II);
• aglutinacija se pojavi s sera I (ab) in II (b) - tretjo skupino B (III);
• če pride do reakcije s tremi serumi, se lahko šteje, da je IV. krvna skupina AB (IV) dodaten postopek z reagenti skupine AB (IV), ki so standardne, če v tem kapljico ni aglutinacije.

Ekspresna metoda za faktor Rh

Metoda določanja krvnih skupin po sistemu ABO prevzame hkratno detekcijo Rh faktorja (Rh).

Površina plošče je predhodno omočena in na njej napišejo "kontrolni serum" in "antiresusni serum". Potem se pod napisi položi ena ali dve kapljici potrebnih reagentov in jim dodan analiziran material. Če želite to narediti, lahko po pojavu strdka (polovica volumna seruma) uporabljate kri iz prsta (v isti količini kot volumen seruma) ali rdečih krvnih celic, ki so ostali na dnu cevi. Izbira gradiva za končni rezultat ne vpliva. Nato krv in serum pomešamo s suhim steklenim drogom, nato pa počakamo, da se reakcija pojavi pet minut. Za odpravo lažnih odčitkov po treh do štirih minutah dodamo izotonično raztopino natrijevega klorida (samo nekaj kapljic). Zelo pogosto se izvaja določanje krvne skupine glede na sistem ABO in Rh.

Če pride do aglutinacije eritrocitov v kapljicah s serumom, to kaže na pozitiven krvni izpuh. Po statističnih podatkih se Rh + pojavi v 85% svetovnega prebivalstva. Pomanjkanje tega nam omogoča, da govorimo o Rh-negativni pripadnosti. Če se je pojavila aglutinacija v kontrolnem serumu, je postala neuporabna. Na žalost algoritem za določanje krvne skupine glede na sistem ABO ne deluje vedno popolnoma.

Katere napake lahko naredimo s to tehniko?

Netočnosti pri določanju krvi v določeni skupini so odvisne od naslednjih razlogov:

• Tehnično.
• Biološka specifičnost krvi.
• Nepopolna narava standardnih serumov in eritrocitov.

Tehnične napake

Možne napake pri določanju krvne skupine sistema ABO na križišču:

• Nepravilni serum na plošči.
• Napačna kvantitativna razmerja materiala.
• Uporaba nezadostno čistih plošč ali ploščic, ki pridejo v stik s krvjo (vsak serum je treba zbrati z ločeno pipeto, ki jo je treba sprati z raztopino natrijevega klorida (pri koncentraciji 0,9%)).
• Nepravilno beleženje analiziranega materiala.
• Neupoštevanje časa, ki je potreben za začetek aglutinacije - ne bi smeli biti hitri in upoštevati reakcije pred iztekom petih minut, ker ima lahko kri šibke aglutinogene. Pretiravanje ni prav tako potrebno, ker se kapljice lahko sušijo z robov in vodijo do lažno zaporno kazen. Pomembno je, da upoštevate pravila za določanje krvne skupine glede na sistem ABO.
  
• Napačno centrifugiranje lahko vodi do napačnega rezultata.
• Temperatura zraka, ki presega dovoljeno, vpliva na odsotnost aglutinacije. Da bi se izognili takšnim napakam, morate uporabiti poseben serum, namenjen za delo v vročih podnebjih. Določite krvne skupine na ploščici ali plošči, katere zunanja površina pade v hladno vodo.

Napake biološke specifičnosti

Napake, povezane z biološko specifičnostjo analizirane krvi, so razdeljene na dve vrsti.

• Odvisno od značilnosti rdečih krvnih celic.
• Napake zaradi bioloških značilnosti seruma.

Razmislimo o vsaki vrsti podrobneje.

Odvisno od značilnosti rdečih krvnih celic

• Pozna aglutinacija zaradi "šibkih" oblik eritrocitov in antigenov. Da bi se izognili napakam, je treba določiti krvno skupino darovalcev in prejemnikov, ki uporabljajo standardne eritrocite. Ugotovite aglutinogen A₂ je treba ponovno preučiti z drugimi vrstami reagentov in drugih jedi, s čimer se poveča čas snemanja.
• "Panagglutinacija" ("avtoaglutinacija") - sposobnost krvi, da pokaže enako reakcijo nespecifičnega znaka z vsemi serumi, vključno z lastno. Po petih minutah se zmanjša akutnost takšne aglutinacije, čeprav se mora intenzivirati. Podobni primeri so opaženi pri bolnikih z rakom, sežgano itd. Kot kontrolo je treba oceniti pojav aglutinacije analiziranih eritrocitov v standardnem serumu četrte skupine in slanice. Pri "panagglutinaciji" se krvna skupina določi kot posledica trojnega pranja rdečih krvnih celic. Če ne daje želenega rezultata, je treba ponovno vzorčiti vzorec krvi v predhodno segreti epruveti in postaviti vzorec v termo posodo, da se ohrani temperatura 37 stopinj Celzija in več. Nato je treba dostaviti v laboratorij, kjer se ohrani zgornja temperatura in se uporablja fiziološka fiziološka raztopina, plošča in reagenti.

• Včasih so rdeče krvne celice krvi, ki jih analiziramo, urejene kot "stebri kovancev" in jih jemljejo kot aglutinati. Če dodate dve kapljici izotonične raztopine in nežno tresite ploščo, rdeče krvne celice vzemite v pravilni položaj.
• Nepopolna ali mešana aglutinacija se pojavlja pri bolnikih z drugo, tretjo in četrto skupino zaradi presaditve kostnega mozga ali v prvih treh mesecih po transfuziji krvi 0 (I).

Zaradi bioloških značilnosti seruma

• Med rutinskim testiranjem se odkrijejo protitelesa drugačne specifičnosti kot posledica predhodne preobčutljivosti. To moramo določiti in vzeti rdeče krvne celice brez vsebine antigena, na katerega se odkrije imunizacija. Prejemnik mora nujno izbrati združljivo krvno skupino darovalca posamezno.
• Nobenih protiteles A in B, ki so opaženi pri novorojenčkih in bolnikih, ki trpijo zaradi zatiranja humoralne imunosti.
• Pri oblikovanju "kovancev" je treba nenormalni rezultat potrditi z uporabo standardnih rdečih krvnih celic prve skupine. Raztopina natrijevega klorida in zvijanje plošče pomagata razlikovati prave aglutinate in "kovance".
  

Napake, povezane z uporabo slabih standardnih eritrocitov in serumov

Slabi serumi s preteklim rokom uporabnosti ali z titrom manj kot 1:32 lahko sprožijo šibko in pozno aglutinacijo. Uporaba takšnih reagentov je nesprejemljiva.

Uporaba neustreznih standardnih eritrocitov ali serumov, pripravljenih v nesterilnih pogojih in nezadostno konzerviranih, povzroči nastanek "bakterijske" aglutinacije, ki ima nespecifično naravo.

Obstaja veliko priljubljenih predpostavk o krvnih skupinah sistema ABO, ki so se pojavili takoj po odkritju v različnih svetovnih kulturah. Torej, na primer v tridesetih letih prejšnjega stoletja na Japonskem in v nekaterih drugih državah je postala popularna teorija, ki je krvno skupino povezala z eno ali drugo vrsto osebnosti. Podobne teorije so danes priljubljene.

Obstaja tudi mnenje, da je oseba, ki ima skupino A, izpostavljena hudi mucenju, O je povezan z dobrimi zobmi, in skupino A2 - z najvišjo stopnjo IQ. Toda takšne trditve niso znanstveno dokazane.

Preučili smo definicijo krvnih skupin z uporabo sistema ABO z uporabo standardnih serumov.