PCR analiza: kaj je to? Kako pravilno opraviti test PCR

Ne tako dolgo nazaj je bila razvita zanesljiva, zelo občutljiva in hitra metoda diagnosticiranja različnih človeških nalezljivih bolezni. Ta metoda se imenuje "PCR analiza". Kaj je to, v čem

Zgodovina odkritja

Izumil je metodo verižne reakcije s polimerazo (PCR) ameriškega znanstvenika Caryja Mullisa leta 1983. Sprva patentirana diagnostična metoda družba "Cetus Corporation", v kateri je delal njegov ustvarjalec. Toda leta 1992 so bile vse pravice in patenti prodane podjetju "Hoffman-La Roche". Po tem se je izkazalo, da so bile podobne študije izvajajo vzporedno in so poročali drugi biologi ZDA, kot so Alice Chen, David Edgar, John RRE. Leta 1980 so sovjetski znanstveniki A. Slyusarenko, A. Kaledin in S. Gorodetsky. Zato ni bilo mogoče določiti edinega imetnika pravic. Mnogi izjemni biokemisti so prispevali k razvoju metode polimerazne verižne reakcije in patentirali svoje inovacije. Trenutno se PCR analiza izvaja povsod v posebej opremljenih laboratorijih.

Bistvo PCR diagnostične metode

PCR analiza: kaj je to in kako deluje? Bistvo metode je, da se v posebnem mikrobnem mediju s posebnim encimom DNA polimeraze pod umetnimi pogoji poveča. Če želite to narediti, pomnožite obstoječi DNA-material. Tako se bo v prisotnosti patogenega mikroorganizma v vzorcu njegova količina povečala z biokemičnimi laboratorijskimi manipulacijami in bakterije v mikroskopu ni mogoče zaznati.

Kako se izvaja materialna raziskava?

Analiza zahteva:

• DNA matrika;
• praškom, ki povezujejo konce drobcev materiala;
• toplotno stabilen DNA polimerazni encim;
• kemične snovi, ki zagotavljajo pravilno delovanje encimov;
• pufrsko raztopino, potrebno za ustvarjanje primernih pogojev za rast in razvoj materiala DNA.

  

Za izvedbo PCR se izvede 25-30 ponovitev, sestavljenih iz treh stopenj: denaturacije, žarjenja in raztezanja.

Za analizo verižne reakcije s polimerazo uporabljamo posebno napravo - ojačevalnik. Sodobna oprema vam omogoča, da nastavite potreben program za ogrevanje in hlajenje cevi za odpravo napak med diagnozo.

Kje se uporablja diagnoza?

Metoda verižne reakcije s polimerazo se uporablja na različnih področjih medicine:

• Forenzični znanstveniki jo uporabljajo za prepoznavanje genetskega materiala, kot so lasje, slina ali kri;
• PCR analiza krvi pomaga pri genotipizaciji, na primer, za odkrivanje individualne genetsko modificirane reakcije na določeno zdravilo;
• s pomočjo takšne metode ugotovi obstoj družinskih vezi med ljudmi;
• najbolj priljubljena PCR metoda je postala v medicinski diagnostiki za opredelitev različnih nalezljivih bolezni.

Katere okužbe razkrivajo PCR?

Torej, zdravilo dolgo in uspešno uporablja analizo PCR. Kaj je, smo se že naučili. In kakšne patogene je mogoče odkriti z njim? Metoda PCR diagnosticira naslednje nalezljive bolezni:

• hepatitis A, B, C;
• ureaplazmoza;
• Kandidijaza;
• klamidija;
• mikoplazmoza;
• gardnerellez;
• infekcijska mononukleoza;
• trihomonijaza;
• papiloma virus;
• tuberkuloza;
• okužba herpesa 1. in 2. vrst;
• Helikobakterioza;
• citomegalovirus;
• difterija;
• salmoneloza;
• Okužba s HIV.

  

Prav tako se pri diagnostiki raka uporabljajo metode PCR.

Prednosti

Diagnoza PCR ima več prednosti:

1. Visoka občutljivost. Tudi s samo nekaj molekul DNA mikroorganizma, analiza PCR določa prisotnost okužbe. Metoda bo pomagala pri kroničnih in latentnih boleznih. V takih primerih je pogosto mikroorganizem neobdelan na druge načine.
2. Za študij je primeren vsak material, kot so slinavka, kri, spol, lasje, epitelijske celice. Najpogostejši je krvni test in urogenitalni razmaz na PCR.

   

3. Ne zahteva dolgoročne pridelave poljščin. Avtomatiziran diagnostični postopek vam omogoča, da rezultate študije dobite po 4-5 urah.
4. Metoda je skoraj 100% zanesljiva. Zabeležili so le posamezni primeri lažno negativnega rezultata.
5. Sposobnost prepoznavanja več vrst patogenov iz enega samega vzorca materiala. To ne le pospeši proces diagnosticiranja bolezni, ampak tudi znatno zmanjša materialne stroške. Zdravnik pogosto predpiše celovito analizo PCR. Cena pregleda, ki jo sestavlja opredelitev šestih patogenov, je približno 1500 rubljev.

Priporočila za pripravo na analizo

Da bi bili rezultati zanesljivi v študiji PCR, je treba analizo opraviti po priporočilih za predhodno pripravo diagnoze:

1. Pred odložitvijo sline se morate vzdržati hrane in zdravil 4 ure pred odvzemom materiala. Takoj pred postopkom sperite usta s kuhano vodo.
2. Navedena pravila je treba upoštevati pri odvzemu vzorca z notranje površine ličila. Po izpiranju priporočamo, da se lahka masaža kože izvede, da se izloča izločanje žleze.
3. Urin se običajno pobere doma. Če želite to narediti, morate voditi temeljito stranišče genitalij. V sterilnem plastičnem vsebniku je treba zbrati 50-60 ml urina. Da bi zagotovili čistost materiala, je priporočljivo, da ženske vstavijo tampon v vagino, in moški maksimalno potegnejo kožno gubo. Med menstrualnim tokom ne morete vzeti materiala.
4. Za dobavo sperme se morate vzdržati spolnega odnosa 3 dni pred odvzemom materiala. Prav tako zdravniki svetujejo, da zavrnejo obisk savne in vroče kopeli, pijejo alkohol in začinjeno hrano. 3 ure pred preskusom se morate izogibati uriniranju.
5. Za dobavo urogenitalnega razmaza, na primer, če se izvede analiza na PCR za klamidijo, se ženskam in moškim priporoča, da imata 3 dni počitka. 2 tedna pred preskusom antibakterijska zdravila ne smete jemati. Za teden dni morate prenehati uporabljati intimne gele, mazila, vaginalne supozitorije, brizganje. 3 ure pred preskusom se morate izogibati uriniranju. Med menstruacijo se zbiranje materiala ne izvaja, šele po 3 dneh po prenehanju izpuščanja krvi lahko vzame urogenitalni razmaz.

PCR med nosečnostjo

Čakalna doba za otroka, številne nalezljive bolezni, spolno prenosljive bolezni, so zelo nevarne za razvoj normalno ploda. Spolno prenosljive bolezni lahko sproži intrauterino razvoja, splav ali prezgodnji porod, prirojene okvare otrok. Zato je zelo pomembno, da opravite zgodnji PCR test. Analizo je treba predložiti pri registraciji - do 12 tednov.

Material se vzame iz cervikalnega kanala s posebno krtačo. Postopek je neboleč in ne predstavlja nevarnosti za otroka. Običajno med nosečnostjo analiziranem za metodo Chlamydia PCR, kot tudi ureaplasmosis, mikoplazmozo, citomegalovirusom, herpes, papiloma virusa. Tako kompleksen pregled se imenuje PCR-6.

PCR za diagnozo HIV

Ker je verižna reakcija s polimerazo zelo občutljiva na spremembe v telesu in v pogojih diagnoze, lahko številni dejavniki vplivajo na rezultat. Zato analiza PCR za okužbo s HIV ni zanesljiva metoda, njegova učinkovitost je 96-98%. V preostalih 2-4% primerov preskus daje lažne pozitivne rezultate.

Toda v nekaterih primerih se HIV ne more izogniti brez diagnostike PCR. Običajno se uporablja za ljudi z lažno negativnim rezultatom ELISA. Takšni kazalci kažejo, da oseba še ni razvila protiteles proti virusu in jih ni mogoče odkriti brez večkratnega povečanja števila. To lahko dosežemo s krvnim testom z uporabo metode PCR.

Tudi ta diagnoza je potrebna za otroke prvega leta življenja, ki se rodijo iz HIV pozitivne mame. Metoda je edini način za zanesljivo določanje otrokovega statusa.

PCR za diagnozo hepatitisa

Metoda verižne reakcije s polimerazo omogoča odkrivanje DNA virusa hepatitisa A, B, C dolgo pred nastankom protiteles proti infekciji ali pojavu simptomov bolezni. Zlasti učinkovita je analiza PCR za hepatitis C, saj v 85% primerih taka bolezen poteka brez asimetričnega in brez pravočasnega zdravljenja prehaja v kronično fazo.

Pravočasno odkrivanje patogena bo pomagalo preprečiti zaplete in podaljšano zdravljenje.

Celovita raziskava PCR

Kompleksna analiza PCR: kaj je to? To je Pregled polimezarnoy verižno reakcijo Postopek, ki obsega istočasno določanje več vrst okužb: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, Trichomonas, citomegalovirusa, ureaplazma urealichyum, herpes 1. in 2. vrste, gonoreja, papiloma virus. Cena takšne diagnostike se giblje od 2000 do 3500 rubljev. odvisno od klinike, uporabljenih materialov in opreme, pa tudi od vrste analize: kvalitativne ali kvantitativne. Kaj je potrebno v vašem primeru - zdravnik se bo odločil. V nekaterih primerih je dovolj samo, da določimo prisotnost patogena, v drugih pa na primer z okužbo s HIV pomembno vlogo kvantitativni titer. Pri diagnosticiranju vseh zgoraj navedenih patogenov se test imenuje "analiza PCR-12".

Pojasnilo rezultatov analize

Dekodiranje analize PCR ni težavno. Obstajajo le dve lestvici kazalca - "pozitiven rezultat" in "negativen rezultat". Če se zazna patogen, lahko zdravniki potrdijo prisotnost bolezni z 99-odstotno zanesljivostjo in nadaljujejo z zdravljenjem bolnika. V kvantitativni metodi določanja okužbe v ustreznem stolpcu bo prikazana numerična vrednost odkritih bakterij. Le zdravnik lahko določi stopnjo bolezni in predpisuje potrebno zdravljenje.

V nekaterih primerih, na primer pri določanju okužbe z virusom HIV s PCR, če je rezultat negativen, postane potrebno opraviti dodatne teste za potrditev rezultatov.

Kje narediti analizo?

Kje lahko analiziram PCR: v državni polikliniki ali v zasebnem laboratoriju? Na žalost so v občinskih zdravstvenih ustanovah oprema in metode pogosto zastareli. Zato je bolje dati prednost zasebnim laboratorijem s sodobno opremo in visoko usposobljenim osebjem. Poleg tega boste v zasebni kliniki dobili rezultate hitreje.

V Moskvi so številni zasebni laboratoriji ponujajo analizo PCR za različne okužbe. Na primer, v teh klinikah kot "Vita", "Integrirani klinike", "srečna družina", "Uro-Pro", izvedli analizo PCR. Cena izpita je 200 rubljev. za opredelitev enega patogena.

Iz tega lahko sklepamo, da je diagnoza nalezljivih bolezni s PCR v večini primerov hiter in zanesljiv način za odkrivanje tujek v telesu v zgodnjih fazah okužbe. V nekaterih primerih pa je vredno izbrati druge metode diagnosticiranja. Potreba po izvedbi take študije lahko določi samo strokovnjak. Dekodiranje analize PCR zahteva tudi profesionalen pristop. Upoštevajte zdravnikov nasvet in ne dajejo svoje teste, ki niso potrebne.